Dữ liệu nhanh hơn, quyết định tốt hơn

Đột biến KRAS được tìm thấy trong 90% trường hợp ung thư tuyến tụy, lên đến 40% trường hợp ung thư đại trực tràng, cũng như các loại khối u khác, chẳng hạn như ung thư phổi, ung thư tuyến giáp và bệnh bạch cầu dòng tủy.

Điều trị đích ở nhiều bệnh ung thư đã cho phép tiến bộ chưa từng có trong kết quả điều trị bệnh nhân. Tuy nhiên, việc thực hiện thường quy xét nghiệm gen bị hạn chế do:

• Lượng mẫu giới hạn (phạm vi từ pg-ng)
• Những thách thức trong việc phát hiện tải lượng đột biến dưới 5%
• Đánh giá chẩn đoán và thời gian quay vòng
• Chi phí

Việc phát hiện đột biến KRAS trong các mẫu không xâm lấn có thể giúp chẩn đoán sớm ung thư tuyến tụy và đại trực tràng. Để tối ưu hóa các chiến lược trị liệu cá nhân, điều quan trọng là phải nhanh chóng sàng lọc các mẫu bệnh nhân để tìm sự hiện diện của nhiều đột biến KRAS.

Sự khác biệt của công nghệ giọt kỹ thuật số

ddPCR đã được gây dựng như một công cụ nhanh chóng và chính xác để phát hiện và theo dõi ngày càng nhiều loại ung thư khác nhau với những ưu điểm sau:

• Sàng lọc nhiều đột biến với tỉ lệ 0,2% trong một giếng, giảm khả năng bỏ sót đột biến trong các mẫu FFPE cfDNA chất lượng kém và các mẫu FFPE cố định bằng formalin với số lượng DNA khuếch đại hạn chế
• Không cần bước tiền khuếch đại – giúp giảm nguy cơ nhiễm và  lỗi
• Độ nhạy cao, nhanh chóng, tiết kiệm chi phí khi chạy thông lượng cao 

Một số nghiên cứu gần đây

A Novel Multiplex Droplet Digital PCR Assay to Identify and Quantify KRAS Mutations in Clinical Specimens

Trong bài báo này, các tác giả đã trình bày một phương pháp Xét nghiệm ddPCR đa mục tiêu mới lạ và đơn giản để hỗ trợ xác định tình trạng đột biến và sự phân loại của các bệnh phẩm lâm sàng dựa trên việc kiểm tra gián tiếp DNA có nguồn gốc từ khối u được liên kết với

sự đa dạng theo phân đoạn của đột biến KRAS, được biết đến là nguyên nhân sớm trong ung thư tuyến tuỵ và các khối u  khác. Thử nghiệm này cho phép phát hiện và định lượng đồng thời các đột biến điểm KRAS phổ biến nhất, mở ra cơ hội để nhanh chóng xác định phản ứng lâm sàng và phát hiện dấu hiệu sớm của sự tái phát ở những loại ung thư trong đó đột biến KRAS là phổ biến và / hoặc là dấu hiệu của việc kháng điều trị. Thiết kế đa mục tiêu của các tác giả thúc đẩy chiến lược ddPCR đảo ngược được mô tả trước đây và liên quan đến các đầu dò cụ thể kiểu hoang dã nhắm mục tiêu là các điểm nóng đột biến nằm ở exon 2 (codon 12 và 13), exon 3 (codon 59, 60 và 61) và exon 4 (codon 146) để phát hiện ra một số đột biến ở độ nhạy tương đối khiêm tốn (giới hạn phát hiện thấp hơn khoảng 1%). Nó cũng có khả năng phát hiện các bộ khuếch đại KRAS mục tiêu bằng cách định lượng đồng thời một vùng của STAT6, một gen xa KRAS trên nhiễm sắc thể số 12.

Các  tác giả đã xác định được 13 đột biến ( G12S, G12R, G12D, G12A, G12V, G12C, G13D, G60V, Q61H, Q61L, A126V, A146T, và A146P) và khuếch đại KRAS mục tiêu trong 100 mẫu DNA tách chiết từ mẫu mô sinh thiết đông lạnh, mẫu FFPE, và mẫu sinh thiết lỏng.

Phương pháp ddPCR này cho thấy hiệu quả nhanh chóng, tiết kiệm chi phí, không bị ảnh hưởng bởi độ tinh khiết của các mẫu bệnh phẩm mang đột biến KRAS. Và phương pháp này có thể dùng cho theo dõi điều trị không xâm lấn để đánh giá đáp ứng điều trị lâm sàng cũng như nhận biết dấu hiệu sớm tái phát bệnh.

Measuring KRAS Mutations in Circulating Tumor DNA by Droplet Digital PCR and Next-Generation Sequencing

Trong bài báo này, các tác giả khẳng định việc phát hiện đột biến KRAS trong DNA ngoại bào thì ddPCR vượt trội hơn NGS trên cả hai khía cạnh: phân tích kết quả và khả năng tương thích với nhiều mẫu mô.