Real-time PCR là một kỹ thuật sinh học phân tử được sử dụng phổ biến trong việc chẩn đoán bệnh nhiễm trên người, trên thú y, bệnh nhiễm thủy sản và cả trong an toàn thực phẩm, trong y sinh như: chuẩn bị thư viện NGS, kiểm tra dược sinh học hay vaccine thế hệ mới. Ứng dụng của Real-time PCR quả thực rất rộng, thế nhưng bạn đã biết ở Việt Nam, kỹ thuật này đang được tận dụng như thế nào chưa? Hãy cùng khám phá trong bài viết này nhé! Tế bào gốc là những tế bào chưa biệt hóa có trong cơ thể chúng ta. Nhiệm vụ cốt lõi của chúng là cung cấp tế bào mới, bù đắp cho các tế bào cũ đã chết đi tại các cơ quan. Nghĩa là chúng giúp các cơ quan “tồn tại và phát triển bền vững” theo thời gian. Đặc tính quan trọng nhất của tế bào gốc là tính vạn năng (pluripotency). Trong các nghiên cứu sử dụng tế bào gốc hay trong các quy trình phát triển liệu pháp tế bào, điều người ta quan tâm là làm sao biết được những tế bào gốc đang được “nuôi” giữ được tính vạn năng của chúng. Một trong những cách để trả lời câu hỏi này là ứng dụng Real-time PCR để khảo sát biểu hiện của một số gen mã hóa cho các nhân tố phiên mã đặc trưng trong tế bào gốc. Là một phân tử sinh học quan trọng trong lĩnh vực sinh thiết lỏng đang ngày một phát triển, cell-free DNA (DNA tự do ngoại bào hay “DNA không có tế bào”), viết tắt là cfDNA, cho phép thực hiện các quy trình sàng lọc không xâm lấn và an toàn hơn để đánh giá sức khỏe của thai nhi, phát hiện sớm các bệnh ung thư ở giai đoạn đầu và phát hiện thải ghép. Kỹ thuật tạo dòng gen là một trong những kỹ thuật sinh học phân tử cơ bản và có rất nhiều ứng dụng. Nó có thể giúp chúng ta sản xuất protein hay kháng thể. Nó có thể giúp chúng ta cải thiện năng suất trồng trọt. Nó có thể giúp chúng ta tạo ra vaccine mới. Bài viết sẽ giúp các bạn hiểu về nguyên lý của kỹ thuật này. Bài viết trình bày chi tiết về quy trình PCR kỹ thuật số của hãng Bio-Rad, hay còn gọi là PCR vi giọt kỹ thuật số (Droplet Digital PCR, ddPCR). Chỉ với bốn bước cơ bản, quy trình sẽ cho phép định lượng DNA, RNA mục tiêu với độ nhạy, độ chính xác và độ lặp lại cao. Hiện tại, khi nhắc đến việc định lượng DNA hay RNA, hầu hết các nhà khoa học sẽ nghĩ đến kỹ thuật PCR định lượng hay QPCR (quantitative PCR). Nói một cách chính xác, QPCR là một dạng của kỹ thuật Real-time PCR nói chung. Trong kỹ thuật này, chúng ta cần phải có ít nhất một cặp mồi để nhân bản vùng gen mục tiêu cần định lượng. Song song đó, quá trình nhân bản sẽ được theo dõi bằng tín hiệu phát ra bởi mẫu dò huỳnh quang bám giữa 2 mồi. Để tiết kiệm chi phí, chúng ta có thể sử dụng chất nhuộm phát huỳnh quang bám vào sản phẩm PCR thay cho mẫu dò. Sinh thiết lỏng (liquid biopsy) là một phương pháp không xâm lấn được sử dụng để chẩn đoán và theo dõi tình trạng bệnh, bao gồm ung thư. Thay vì lấy sinh thiết tại mô bị ảnh hưởng, người ta thu thập “DNA không có tế bào” (cell-free DNA, cfDNA), DNA khối u tuần hoàn (circulating tumor DNA, ctDNA; một tập con của cfDNA và có nguồn gốc từ trong khối u), hoặc tế bào ung thư dạng huyền phù (còn gọi là tế bào khối u tuần hoàn, circulating tumor cells, CTCs) từ máu hoặc các dịch cơ thể khác. Trong bài viết này, chúng ta sẽ cùng nhau tìm hiểu ứng dụng PCR kỹ thuật số (Droplet Digital ™ PCR, ddPCR™) cho quy trình sinh thiết lỏng trong chẩn đoán ung thư, theo dõi và đánh giá các phương thức điều trị cũng như phát hiện sự tái phát sau khi thuyên giảm. Trong bài viết gần đây, tôi đã trình bày với bạn đọc như thế nào là PCR kỹ thuật số và một số ưu điểm nổi bật của nó. Ngoài ra, các bạn cũng có thể tìm hiểu sâu hơn về quy trình PCR kỹ thuật số của hãng Bio-Rad hay còn gọi là PCR vi giọt kỹ thuật số (Droplet Digital PCR, ddPCR) ở đây. Vậy, khi đã đọc xong hai bài viết trên, liệu bạn có tự hỏi rằng “Khi nào nên dùng PCR kỹ thuật số và khi nào thì nên dùng Real-time PCR?” Bạn sẽ tìm thấy câu trả lời trong bài viết dưới đây. Trước tiên, chúng ta cần điểm lại những điểm mạnh của kỹ thuật Real-time PCR truyền thống và PCR kỹ thuật số. Thông thường, nếu chỉ mới dừng lại ở các kỹ thuật sinh học phân tử cơ bản như tách chiết DNA, chạy PCR, điện di gel agarose, v.v…, bạn có thể sẽ cảm thấy bỡ ngỡ khi lần đầu phải “pha chế” một phản ứng Real-time PCR. Thật ra, công việc này không hề phức tạp hay cao siêu như nhiều người tưởng tượng. Và thậm chí nó còn đơn giản hơn cả việc … mở nắp eppendorf nếu bạn chọn được cho mình loại nguyên liệu phù hợp và tiện lợi. Bài viết sau đây sẽ giúp bạn có cái nhìn bao quát về những cách chuẩn bị phản ứng Real-time PCR. Chuyển đến trang  1, 2, 3, 4, 5 |
