Công nghệ Droplet Digital™ PCR (ddPCR) được phát triển bởi Bio-Rad, giúp định lượng chính xác tuyệt đối các đoạn gen mục tiêu, áp dụng trong nghiên cứu cũng như chẩn đoán lâm sàng. Droplet Digital PCR (ddPCR) là một phương pháp ứng dụng công nghệ giọt dầu (water-oil emulsion droplet). Mẫu sẽ được chia nhỏ trong 20,000 vi giọt, phản ứng khuếch đại các phân tử DNA khuôn sẽ được diễn ra trong từng vi giọt. 
 

Hệ thống bao gồm: 

• Máy tạo vi giọt thao tác tay QX200™ Droplet Generator
• Máy đọc tín hiệu vi giọt QX200™ Droplet Reader
• Phần mềm QuantaSoft™
• Hóa chất và vật tư tiêu hao chạy thử máy ban đầu

Đặc điểm nổi bật và lợi ích của hệ thống ddPCR:

• Giải pháp PCR kỹ thuật số với độ chính xác và độ nhạy cao cho nhiều ứng dụng rộng rãi
• Hóa chất PCR kỹ thuật số linh hoạt - được tối ưu hóa cho Đầu dò thủy phân TaqMan và các thử nghiệm sử dụng EvaGreen
• Thiết lập thử nghiệm linh hoạt - có thể mở rộng cho thử nghiệm với độ nhạy cao hoặc công suất cao
• Quy trình làm việc đơn giản và dễ sử dụng với công suất 96 mẫu
• Phân chia giọt bằng công nghệ QX200™ Droplet Digital làm giảm độ lệch từ hiệu quả khuếch đại và chất ức chế PCR
• Thiết kế thử nghiệm thuận tiện - không cần đường chuẩn

Ứng dụng trong nghiên cứu và chẩn đoán: 

• Nghiên cứu chỉ thị sinh học ung thư và biến động số lượng gen – Đo lường sự thay đổi trong tỷ lệ của các đột biết gây ra ung thư, phát hiện những phân tử DNA mục tiêu hiếm, đánh giá các mẫu biến động về số lượng bản sao gen với độ nhạy và độ phân giải cao hơn bình thường.
• Phát hiện tác nhân gây bệnh – Sử dụng độ chính xác cao của hệ thống QX200 để định lượng sự khác biệt nhỏ trong trình tự DNA hay RNA trong việc phát hiện và theo dõi tác nhân gây bệnh
• Định lượng tuyệt đối thư viện NGS mà không cần dùng đến đường chuẩn
• Đo lường sự thay đổi nhỏ cho những mRNA hàm lượng thấp và miRNA với độ tin cậy và độ tái lặp cao
• Kiểm tra chất lượng các mẫu môi trường khác nhau như đất, nước, v.v…
• Kiểm tra mẫu thực phẩm GMO
• Phân tích tế bào đơn (Single cell) với độ nhạy cao

Tương thích: Sử dụng được với các bộ hoá chất mẫu dò TaqMan® và EvaGreen®

QUY TRÌNH DIGITAL PCR:

1. Chuẩn bị phản ứng ddPCR
   Cho DNA, mồi và mẫu dò vào ddPCR supermix của Bio-Rad.
   Có thể sử dụng bộ mồi PrimePCR™ ddPCR Assays đã được chứng nhận.
2. Tạo vi giọt
   Nạp hỗn hợp phản ứng ddPCR vào các giếng của khay tạo giọt.
   Mỗi phản ứng trong máy tạo vi giọt QX200™ tạo ra 8 x 20,000 giọt.
   DNA đích và DNA nền được phân phối ngẫu nhiên vào các vi giọt.
3. Thực hiện phản ứng PCR bằng chất nhuộm EvaGreen® hoặc mẫu dò thủy phân
   Chuyển các vi giọt vào đĩa PCR 96 giếng và đậy nắp.
   Chạy quy trình PCR.
4. Đọc và phân tích kết quả
   Sau khi chạy PCR, đặt đĩa vào máy đọc tín hiệu QX200™.
   Tín hiệu từ các vi giọt dương tính và âm tính sẽ được ghi nhận.
   Phân tích dữ liệu bằng phần mềm QuantaSoft™.